熱啟動(dòng)Bst 4.2 LAMP擴(kuò)增試劑（凍干球）
品牌：HaiGene
貨號(hào)：A3831
規(guī)格：/
品牌：HaiGene
貨號(hào)：A3831
規(guī)格：/
產(chǎn)品介紹：
得益于HaiGene分子酶進(jìn)化技術(shù)平臺(tái)（in silico Design & invitro Evolution Workflow），并持續(xù)聚焦LAMP恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，HaiGene全新升級(jí)的Bst4.2系列，將LAMP擴(kuò)增技術(shù)推入了新的高度。Bst4.2維持了Bst4.0 DNA/RNA通擴(kuò)的能力。在現(xiàn)階段，熱啟動(dòng)HotStart Bst4.2 Polymerase為已知的LAMP擴(kuò)增*佳用酶。Bst4.2全系包含熱啟動(dòng)Aptamer，該配體確保酶在<30℃時(shí)，酶活封閉效率>95%,在>60℃時(shí)1min內(nèi)完全釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系，并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增。并且耐熱性進(jìn)一步提升到70℃。由于擴(kuò)增性能得到質(zhì)的提升，使得LAMP引物篩選難度大幅下降，更易于獲得穩(wěn)定的擴(kuò)增結(jié)果和可靠的終端產(chǎn)品。Bst4.2系列性能如下：
性能優(yōu)勢(shì)：
（1）試劑反應(yīng)溫度提升到70℃，提供更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)囊锱鋵?duì)條件，大幅降低了引物Dimer效應(yīng)。在此條件下，引物篩選難度大幅降低，利于研究及開(kāi)發(fā)人員的引物篩選。除此外，高溫反應(yīng)使得粗樣本的核酸釋放更加充分，易于核酸免提取檢測(cè)，且致病菌毒滅活更加充分。
（2）試劑中加入了HaiGene**開(kāi)發(fā)的Helicaser（解旋因子），使得“啞鈴”結(jié)構(gòu)底物的形成，可以依靠Helicaser來(lái)完成。因此，標(biāo)準(zhǔn)LAMP中的F3/B3引物可以完全移除。同時(shí)Helicaser具有協(xié)助解鏈的功能，使得FIP/BIP引物使用濃度進(jìn)一步下降。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)方案由HaiGene測(cè)試建立，并命名為eLAMP (Easy LAMP)。
1、Bst 4.2 HotStart功能展示
采用熒光酶活測(cè)定法在30℃和60℃條件下測(cè)定HotStart Bst 4.2，結(jié)果顯示與未加入Aptamer的對(duì)照比較來(lái)看。HotStart Bst 4.2在30℃條件下酶活幾乎無(wú)活性，而60℃條件下1min內(nèi)酶活完全釋放，恢復(fù)****活性。
2、以Bst 4.2 SYBR Green試劑進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)LAMP和eLAMP擴(kuò)增比較
以human Total RNA為模板，采用RnaseP LAMP Primer進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)LAMP和eLAMP 擴(kuò)增。在25ul擴(kuò)增體系中加入10ng、1ng和0ng的RNA，70℃反應(yīng)40min。從擴(kuò)增結(jié)果可獲得，在Helicaser的加持下F3/B3可完全去除，對(duì)擴(kuò)增速度幾乎無(wú)影響，并且非特異性擴(kuò)增得到改善。6 Primer LAMP引物濃度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM; F3/B3=0.1 μM。4 Primer eLAMP引物濃度：FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM。
3、以Bst 4.2 Basic試劑進(jìn)行DP-eLAMP探針?lè)〝U(kuò)增
在眾多的探針?lè)↙AMP測(cè)試中，DP-LAMP探針?lè)?Displaceable Probe LAMP)為HaiGene推薦的使用方法（參考PMID: 33626039）。在LAMP擴(kuò)增中將LF或LB引物退火至互補(bǔ)的猝滅oligo，利用鏈置換活性獲得游離的熒光信號(hào)（可參考HaiGene A3831-21說(shuō)明書(shū)資料）。該方案可進(jìn)一步降低LAMP的非特異擴(kuò)增。下圖為DP-eLAMP進(jìn)行三種熒光標(biāo)記探針的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示HotStart Bst4.2總能獲得高特異性和高重復(fù)性的擴(kuò)增。
4、以Bst4.2 L-HNB 試劑進(jìn)行L-HNB (紫羅蘭-淡綠) 變色反應(yīng)（肉眼觀(guān)察）
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，采用eLAMP擴(kuò)增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 對(duì)10000、1000、100、25copies/管的陽(yáng)性RNA進(jìn)行檢測(cè)，ddH20為陰性對(duì)照（4重復(fù)）。下圖為70℃反應(yīng)30min 后的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明L-HNB法獲得清晰易于區(qū)分的顏色變化，極易區(qū)分陽(yáng)性和陰性擴(kuò)增。
5、 以Bst4.2 L-HNB (紫羅蘭-淡綠) 變色反應(yīng)對(duì)反應(yīng)緩沖鹽Tris的耐受性測(cè)試
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，采用eLAMP擴(kuò)增法（FIP/BIP=0.8 μM; LoopF/B=0.4 μM）, 對(duì)1000copies/管的陽(yáng)性RNA進(jìn)行檢測(cè)（2重復(fù)），ddH20為陰性對(duì)照（2重復(fù)）。下圖為70℃反應(yīng)30min 后的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明L-HNB法，在1x濃度下可耐受10mM Tris-HCl的緩沖鹽，陽(yáng)性樣本仍然可以充分的變色。該變色方法不受樣本中緩沖鹽影響。
6、 以Bst4.2 Red試劑進(jìn)行LAMP紅黃變色擴(kuò)增
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前，下圖為70℃反應(yīng)30min后。
7、 以Bst 4.2 Basic試劑搭配 OG 橙綠變色反應(yīng)管（A3821）
以2019-nCoV體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前，下圖為70℃反應(yīng)30min后。
| 產(chǎn)品編號(hào) | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 |
| A3831-00 | HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(無(wú)甘油） | 1600U |
| 10KU | ||
| 100萬(wàn)U | ||
| A3831-01 | HotStart Bst 4.2 Basic Mix(可凍干） | 200T(25μL體系) |
| A3831-02 | HotStart Bst 4.2 SYBR Green Mix(可凍干） | 200T(25μL體系) |
| A3831-03 | HotStart Bst 4.2 Basic Bead(基礎(chǔ)凍干球） | 100T(25μL體系) |
| A3831-04 | HotStart Bst 4.2 SYBR Green Bead(熒光凍干球） | 100T(25μL體系) |
| A3831-05 | HotStart Bst 4.2 Red Bead(紅黃變色凍干球） | 100T(25μL體系) |
| A3831-06 | HotStart Bst 4.2 L-HNB Bead(紫綠變色凍干球） | 100T(25μL體系) |
| 凍干球的訂制服務(wù)：?jiǎn)吻蚍磻?yīng)體積20-100μL | ||
| 用于Bst4.2 LAMP擴(kuò)增的其它輔助品 | ||
| A3821 | OG橙綠變色管 | 96T(25μL體系) |
| A3831-20 | Oligo Lyophilized Solution(引物凍干劑) | 2500T(25μL體系) |
| A3831-21 | LAMP Loop DP-Probe(訂制品) | 800T(25μL體系) |
